大鼠骨骼肌組織提取物?操作流程

大鼠骨骼肌組織提取物操作流程：

1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：

1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。

1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。

1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。

1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。

1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 

1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線。

ME-180(人子宮頸表皮癌細胞)

MFC(小鼠胃癌細胞)

MG-63(人骨肉瘤細胞)

MGC80-3(人胃癌細胞)

MLTC-1(小鼠睪丸間質細胞瘤細胞)

Molt-4(人急性淋巴母細胞白血病細胞)

MRC-5(人胚肺成纖維細胞 )

MS1(小鼠胰島內皮細胞)

MSTO-211H(人肺癌細胞)

NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細胞)

NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞)

NCI-H1650(人非小細胞肺癌細胞)

NCI-H292(人肺癌細胞)

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經瘤細胞)

NCI-N87(人胃癌細胞)

NG108-15(小鼠神經細胞瘤與大鼠神經膠質瘤之融合細胞)

NIH/3T3(小鼠胚胎細胞)

NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)

NRK(大鼠腎細胞)

NRK-52E(大鼠腎小管導管上皮細胞)

OK(負鼠腎小管細胞)

OP9(小鼠骨髓基質細胞)

OS-RC-2(人腎癌細胞)

OVCAR-3(人卵巢癌細胞)

P19(小鼠畸胎瘤細胞)

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)

P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細胞)