淺看多態性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法及特點

　　多態性試劑盒(PCR-RLFP)引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

　　多態性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法：

　　一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

　　1、注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA段作為陽性對照。

　　2、標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

　　3、用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

　　4、在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

　　5、換槍頭，在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

　　6、換槍頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

　　7、重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

　　多態性試劑盒(PCR-RLFP)具有下列特點：

　　1、根據指標的保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。

　　2、靈敏度比常規PCR高2-3個數量級，可以達到幾百拷貝/反應。

　　3、即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。

　　4、一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。

　　5、本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。

　　6、本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。